Surface plasmon resonance (SPR), analyses van cellen in apoptose

Inleiding: Apoptotische cellen geven expressie van phosphatidylserine (PS) aan de buitenkant van hun celmembraan. Annexine-V heeft in aanwezigheid van Ca2+ een sterke affiniteit voor PS. Dit verschijnsel wordt gebruikt voor het aantonen van cellen die in apoptose zijn door het meten van de mate van annexine-V binding aan het celmembraan van cellen in suspensie. Moleculaire interacties kunnen zeer gevoelig geanalyseerd worden met de ’Instrument for Biomolecular Interaction Sensing’ (IBIS). Er wordt hierbij gebruik gemaakt van een goudoppervlak en een optische ‘surface plasmon resonance’ (SPR) biosensor dat veranderingen van de brekingsindex op het oppervlak registreert. Op deze manier wordt de interactie van annexine-V, dat gebonden is aan het oppervlak, met de expressie van PS op de celmembranen van een celsuspensie gemeten. Methoden: Het sensor oppervlak van goud is gecoat met 0.44 mg/ml annexine-V. Er wordt gemeten aan HL-60 cellen in HEPES buffer, die al dan niet 24 uur zijn geïncubeerd met 0,20 mM camptothecine. Resultaten en discussie: Annexine-V werd goed gebonden aan het goudoppervlak. Zowel controle cellen als de camptothecine geïnduceerde cellen gaven een verandering in het SPRsignaal, waarbij het verschil bij de apoptotische cellen het grootst was. Er werd in een HEPES buffer gemeten, wat geleid kan hebben tot spontaan geïnduceerde apoptose in de controle cellen. Conclusie: De metingen van de veranderingen van het SPRsignaal m.b.v. de IBIS voor het aantonen van apoptotische cellen is een veelbelovende methode om apoptose te meten.